斯坦福大学血液肿瘤领域学者在《Acta Haematologica》发表了一篇面向临床医生的ALL MRD检测实践指南，系统梳理了MRD检测的技术细节、临床应用难点与结果解读原则，今天我们就带大家深入解读这篇综述，破解MRD检测的临床实操密码。
MFC成本低，普及度最高，但NGS MRD检测灵敏度最高，适用于低水平MRD检测，其结果与预后具有强相关性，在临床上应用越来越广泛。
虽然MFC灵敏度可满足指南基础要求（10-4），但ASO-PCR/NGS的更高灵敏度能检测到MFC漏检的低水平MRD，有研究证实这些漏检患者的预后相比MRD均阴性的患者显著更差，无论是在儿童还是成人ALL中。
在HCT/CAR-T治疗中，深度MRD检测的预后价值也已明确：在一项儿童ALL移植的临床研究中，HCT前NGS MRD阴性的患者移植后复发率为0。另外有研究证实CAR-T前后的NGS MRD水平可预测治疗应答和长期生存。
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关注每个克隆序列的检测限（LOD）/空白限。并非所有序列的灵敏度均为10-6，低于LOD的检测结果可能为假阳性，需谨慎解读。
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治疗后（尤其是HCT/CAR-T后）新出现的显著性克隆很大可能是非白血病细胞的克隆扩增，并非复发。
- 低独特性的克隆序列（如轻链）可能长期存在但无疾病复发，需结合临床，或咨询检测机构/专家。
3、Ph+ ALL的MRD检测
Ph+ ALL由t (9;22)易位产生BCR::ABL1融合蛋白（p190亚型为主），传统检测依赖BCR::ABL1 qPCR检测，但其存在缺陷：部分Ph+ ALL患者的BCR::ABL1可在多谱系造血细胞中表达（非仅淋巴母细胞），此时qPCR检测到的融合转录本并非白血病 MRD，而是意义未明的克隆性造血。现已证明相较于BCR::ABL1 qPCR，ASO-PCR和NGS是确定Ph+ ALL MRD更精确的方法。
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有研究证实血液与骨髓的MRD结果具有一致性，但骨髓的检测灵敏度显著高于血液。NGS方法可显著提升血液与骨髓的一致性。在NGS MRD缓解后的某些场景下，临床医生可能会采用基于血液的NGS MRD监测进行随访，而非频繁的骨髓评估。
- 中枢神经系统（CNS）受累是ALL复发的重要原因，传统脑脊液细胞学（CC）存在显著局限性：低估CNS受累、低细胞量时难以区分恶性母细胞与反应性淋巴细胞，而MFC是脑脊液MRD检测的优选技术，能独立预测CNS复发。NGS检测脑脊液MRD的研究是未来具有潜力的领域。
现有指南明确推荐诱导治疗结束、巩固治疗后是MRD检测的核心节点，HCT/CAR-T治疗前后也建议检测MRD，这些节点的结果可指导治疗策略调整。大多数一线治疗后的复发发生在诊断后的前3-5年内，HCT的ALL患者复发中位时间为7个月，在此期间进行MRD监测非常重要。
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诱导治疗后：B-ALL若诱导后MRD水平高，可早期加用 blinatumomab（双特异性抗体）提升缓解深度。
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巩固治疗后：若持续检测到MRD，提示预后差，需治疗升级（如异基因HCT）；若MRD转阴，提示长期预后良好。
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缓解期监测：MRD转阴后再次出现可预警形态学复发，需及时更换治疗方案。
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临床试验替代终点：MRD可作为新型疗法的疗效评价指标（如达雷妥尤单抗治疗T-ALL、一线CAR-T、Ph+ ALL的TKI维持停药）。
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复发后治疗：MRD应答可反映缓解深度，但即使复发后 MRD转阴，患者仍有再次复发的风险，MRD动力学对复发/生存的影响仍需研究。
1、理解所使用检测的LOD/空白限及技术特征，如NGS MRD检测中的克隆序列独特性（IgH 重排比轻链更具预后价值）。
2、Ph+ ALL避免单独使用BCR::ABL1 qPCR，需联合/替代使用ASO-PCR/NGS。
3、脑脊液检测中常规加入MFC，替代传统细胞学提升CNS受累检测准确性。
4、使用NGS MRD进行HCT前后或CAR-T细胞治疗时，血液可作为持续MRD监测的来源。
5、遇结果解读难题时，及时咨询检测机构/血液肿瘤专家。
艾沐蒽专注于免疫组二代测序领域多年，是于2016年全国首家推出血液肿瘤NGS MRD检测产品Seq-MRD®的公司。Seq-MRD®适用于B/T系白血病、B/T系淋巴瘤、多发性骨髓瘤，能够帮助临床医生预测长期疗效、评估治疗效果、监测缓解状态以及监测早期复发。经过多年的积累和发展，Seq-MRD®在临床检测和科学研究上均取得不少成果，并获得国际市场认可。
艾沐蒽创始人参与了中华医学会儿科学分会血液学组等权威机构联合发布的《儿童白血病微小残留病监测与临床应用指南（2026）》的撰写，为NGS MRD指导临床治疗的标准化与规范化提供重要指导意见。
Seq-MRD®获得欧盟CE资质（注册号：DE/CA20/01-IVD-Luxuslebenswelt-190/22），获批的是人淋巴B细胞微小残留病基因检测试剂盒（可逆末端终止测序法）。
艾沐蒽推出的Seq-MRD®血液癌症MRD检测是最早批实现商业化的产品，自2016年研发专利技术至今，艾沐蒽Seq-MRD®已经获得3项国家发明专利：
[1]“一种应用于高通量测序检测T细胞白血病微小残留病的引物组合及试剂盒”（专 利 号: 2016 11204857.0，授权公告号:CN 106957906 B）
[2]“一种检测微小残留病MRD的试剂盒”（专 利 号: 2018 1 1550133.0，授权公告号: CN 109652518 B）
[3]“一种检测微小残留病MRD的方法”（专 利 号: 2018 1 1549203.0，授权公告号: CN 109680062 B）
艾沐蒽拥有自主研发的生信分析平台，艾沐蒽Seq-MRD® 已经获得3项国家计算机软件著作：
[1]“免疫组库MRD检测自动化报告系统[简称ImmuReport] V1.0”（登记号：2019SR0916207）
[2]“Seq-MRD检测自动化分析系统（DiscTermite）[简称：DiscTermite]0.4.6“（登记号：2019SR1131517）
[3]“基于免疫组库二代测序的微小残留病（MRD）检测数据处理系统”（登记号：2020SR0507594）
1、艾沐蒽联合浙大附一黄河教授完成的《新型CAR-T细胞研发及其治疗恶性血液病临床转化创新体系建立》获2023年度浙江省科学技术进步奖一等奖。Seq-MRD®在该技术的创新与应用中起到了关键性作用。
2、艾沐蒽申报的“免疫组TCR/Ig高通量测序技术/血液肿瘤微小残留病（MRD）检测/Seq-MRD®”因其创新性、前沿性、市场实用性荣获“2022年度CCTB中国肿瘤标志物产业创新大会创新技术/产品评选”项目二等奖。
2023年获批了【全血/骨髓基因组DNA提取试剂盒】（离心吸附柱法）备案编号：浙杭械备20230798 ，试剂盒分别适用于人外周血、骨髓样本的核酸的提取。
Seq-MRD®发表相关文献
1、Huang Y, Zhao H, Shao M, Zhou L, Li X, Wei G, Wu W, Cui J, Chang AH, Sun T, Hu Y, Huang H. Predictive value of next-generation sequencing-based minimal residual disease after CAR-T cell therapy. Bone Marrow Transplant. 2022 Jun 1. doi: 10.1038/s41409-022-01699-2. Epub ahead of print. PMID: 35650329.（点击链接可查看文章内容）
2、Chen H, Gu M, Liang J, Song H, Zhang J, Xu W, Zhao F, Shen D, Shen H, Liao C, Tang Y, Xu X. Minimal residual disease detection by next-generation sequencing of different immunoglobulin gene rearrangements in pediatric B-ALL. Nat Commun. 2023 Nov 17;14(1):7468. doi: 10.1038/s41467-023-43171-9. （点击链接可查看文章内容）
3、Min’er Gu,Yahong Xia, Jingying Zhang, Yongmin Tang, Weiqun Xu, Hua Song Xiaojun Xu. The effectiveness of blinatumomab in clearing measurable residual disease in pediatric B-cell acute lymphoblastic leukemia patients detected by next-generation sequencing. Cancer Med. 2023 Dec;12(24):21978-21984. doi:10.1002/cam4.6771. （点击链接可查看文章内容）
4、Yan N, Wang ZL, Wang XJ, et，al. Measurable residual disease testing by next generation sequencing is more accurate compared with multiparameter flow cytometry in adults with B-cell acute lymphoblastic leukemia. Cancer Lett. 2024 Jul 4;598:217104. doi: 10.1016/j.canlet.2024.217104.
2023年DelveInsight公司发布的MRD国际市场研究报告中，艾沐蒽/Seq-MRD®是中国唯一一家公司/产品进入国际调研市场报告。DelveInsight是一家领先的医疗保健市场研究和商业咨询公司，以其现成的联合市场研究报告以及为医疗保健行业的公司提供的定制解决方案而闻名。
杭州艾沐蒽生物科技有限公司成立于2016年，是国际前沿的专注于免疫驱动医学技术的国家高新技术企业和专精特新企业。创始人团队来自美国芝加哥大学，在2010年开始使用免疫组基因高通量测序技术开展各种疾病相关研究，于2016年通过自主研发，全国首家推出NGS-MRD血液肿瘤微小残留病（MRD）检测Seq-MRD®，并授权泛生子使用。同时，公司拥有Immun-Traq®肿瘤治疗伴随诊断、Immun-Cheq® 免疫力测评以及ImmuHub®免疫组测序科研服务产品，并布局有基于AI机器学习算法的T-classifier®肿瘤早筛、单细胞测序、新抗原、TCR和抗体发现等平台管线。目前为止发表了50余篇论文，其中包括：The New England Journal of Medicine(IF:158.5), The Lancet(IF:98.4), Nature(IF:65), Signal Transduction and Targeted Therapy(IF:40), Cellular and Molecular Immunology(IF:24), Nature Communications (IF:17)等多篇高分杂志。公司构建几十项发明专利和软件著作权为核心的自主知识产权体系，为医院临床、生命科学研究、新药开发等提供解决方案和产品。艾沐蒽专注于通过解码适应性免疫系统来改变疾病的诊断和治疗，并致力于推进免疫驱动医学领域发展。
