艾沐蒽助力发表|TCR测序为开发新型疫苗提供了理论基础

轮状病毒（RV）是一种全球性传播的人畜共患病病毒，主要引发 5 岁以下儿童及幼龄哺乳动物的急性胃肠炎和腹泻，在中低收入国家死亡率较高，作为一种严重的传染病，研究其对免疫系统的反应尤为重要。

近日吉林农业大学兽医医学院的专家团队在Veterinary Microbiology杂志发表题为“Rotavirus induces mucosal B-cell responses through the TLR3/TRIF and MAVS pathways”的文章，揭示了轮状病毒通过TLR3/TRIF和RIG-I/MAVS信号通路诱导B细胞免疫应答的分子机制。该研究采用了艾沐蒽的ImmuHub^® TCR测序分析技术平台，揭示了TRIF通路会影响CD4⁺T细胞对B细胞的辅助功能，从而调节B细胞免疫。该研究结果为开发广谱、长效的RV疫苗提供了理论依据。

对RV感染后的小鼠CD4⁺T细胞进行TCR测序。蜗牛图显示，与WT小鼠相比，TRIF^⁻/⁻小鼠的“1”环层比例（单克隆T细胞比例）减少，表明TRIF敲除后的CD4⁺T细胞发生变化（见图1A）。CDR3氨基酸长度分布如图1B所示，主要集中在10-18个AA之间。TRIF^⁻/⁻小鼠 CD4⁺T细胞的CDR3克隆频率显著改变（图1C），TRBV13-2、TRBJ1-2 等V/J基因片段的使用频率降低（图1D-F）。

同时，在RV感染后测定了WT和TRIF^⁻/⁻小鼠PPs和脾脏中滤泡辅助性T细胞（Tfh细胞，B细胞激活的关键辅助细胞）的频率。PPs中Tfh细胞比例显著低于WT小鼠（图1E-F）。以上结果提示TRIF通路缺失会影响CD4⁺T细胞对B细胞的辅助功能。

图1

RV感染后，TLR3^⁻/⁻和TRIF^⁻/⁻小鼠的脾脏、MLNs、PPs中，生发中心（GC）激活型B细胞比例显著下降（图2）；血清中总IgA、IgG1、IgG2a（TRIF^⁻/⁻）及 IgG、IgG1（TLR3^⁻/⁻）抗体水平显著降低，小肠十二指肠、空肠、回肠的CD138⁺IgA⁺浆细胞数量减少（图3）。表明TLR3/TRIF通路是B细胞分化为浆细胞并分泌抗体的关键，该通路的缺失会削弱B细胞分泌抗体的能力。

图2

图3

骨髓移植实验显示，接受TRIF^⁻/⁻供体骨髓的受体小鼠，感染RV后 MLNs中GC B细胞的绝对数量显著低于WT供体组（图4），虽频率无差异，但证实TRIF通路对于RV特异性B细胞的积累至关重要。

图4

MAVS^⁻/⁻小鼠感染后，MLNs和PPs中GC激活型B细胞比例、PPs 中B220⁺IgA⁺细胞比例，以及脾脏、MLNs中CD138⁺IgA⁺浆细胞比例均显著降低（图5），提示MAVS通路与TLR3/TRIF通路类似，是B细胞免疫激活的重要调控因子。

图5

TLR3^⁻/⁻MAVS^⁻/⁻双敲除小鼠的PPs中GC B细胞、B220⁺IgA⁺、B220⁺IgG2a⁺细胞比例、血清IgG1水平、以及小肠各段 CD138⁺IgA⁺细胞数量均进一步下降；且脾脏和PPs中Ki67⁺增殖型B细胞比例显著低于WT小鼠（图6）。证实两条通路协同调控B细胞增殖能力，其缺失会导致 B 细胞免疫功能的叠加损伤。

图6

本研究证实了轮状病毒通过TLR3/TRIF和MAVS两条信号通路协同调控B细胞介导的体液免疫：一方面通过影响CD4⁺T细胞的V/J基因重排和Tfh细胞功能，为B细胞提供充足辅助信号；另一方面直接调控GC B细胞的激活、浆细胞分化及抗体分泌，同时维持B细胞的增殖能力，最终参与病毒清除和抗感染免疫。该研究为设计靶向这两条通路的免疫佐剂或新型RV疫苗提供了理论靶点。

文献来源

Rong-Rong Zhang,et,al.Rotavirus induces mucosal B-cell responses through the TLR3/TRIF and MAVS pathways. Veterinary Microbiology,Volume 314,2026,110910,ISSN 0378-1135.