胶质母细胞瘤（GBM）素有脑癌之王之称，恶性程度极高、免疫抑制极强，是典型的冷肿瘤——T 细胞进不去、杀不动，免疫治疗屡屡碰壁。
单次瘤内注射溶瘤病毒rQNestin34.5v.2，就能让胶质母细胞瘤转变为热肿瘤，诱导深度、持久的T细胞激活与肿瘤杀伤，且疗效与T细胞克隆扩增直接相关！
胶质母细胞瘤（GBM）是恶性程度极高的中枢神经系统肿瘤，免疫抑制微环境是治疗核心瓶颈。
· 肿瘤内T细胞浸润极少，且多滞留于血管周围，无法深入肿瘤实质；
· 免疫检查点抑制剂在GBM中多次临床失利，传统疗法复发率高、预后极差；
· 溶瘤病毒可选择性裂解肿瘤细胞、诱发免疫原性死亡，是将冷肿瘤转为热肿瘤的潜力方案，但人类胶质瘤中长效免疫激活机制仍不明确。
研究采用多组学+空间原位技术联合解析，完整覆盖组织、细胞、克隆、分子层面：
1. 临床样本：共计16例复发GBM患者，单次瘤内注射溶瘤病毒，配对治疗前活检/治疗后手术标本；
2. 空间蛋白组：CODEX多重免疫荧光，27个标志物，解析细胞表型与空间互作；
3. 空间转录组：10X Genomics Xenium，380个肿瘤免疫基因+100个定制探针，定位T细胞活化、肿瘤分型、病毒残留；
4. TCR测序：对33例患者肿瘤组织+外周血进行TCRβ链高通量测序，分析克隆扩增、克隆型、治疗前后变化；
5. 单细胞RNA-seq：验证T细胞功能状态与TCR克隆对应关系；
6. 统计分析：空间邻近分析、细胞邻域（CN）、生存关联、克隆富集分析。
· 治疗后CD8⁺ T、CD4⁺ T细胞密度显著升高，CD8/Treg比例提升；
· T细胞可深入肿瘤实质，疗效维持超6个月，最长达2年以上；
· 形成淋巴聚集体，为免疫应答提供基础。
fig. 2 T细胞深度浸润与淋巴聚集体
fig. 3 T细胞密度随时间/剂量变化散点图
· GZMB⁺ CD8⁺ T细胞与 cl-Casp3⁺凋亡肿瘤细胞空间高度邻近；
· 两者距离越近，无进展生存期越长、肿瘤生长越慢。
fig. 4 GZMB⁺T细胞紧邻凋亡肿瘤细胞原位图
fig. 5 T细胞-肿瘤距离与PFS、肿瘤生长速率关联图
· 肿瘤近端：早期活化（NR4A1、CD69）+组织驻留（CD103、HOBIT）+高细胞毒性；
· 淋巴区域：干细胞样T细胞，负责持续补充效应T细胞。
fig. 6 Xenium 显示活化 T 细胞紧贴肿瘤细胞
通过TCR测序揭示：
· 肿瘤内T细胞克隆性显著上升，血液无明显变化，反应高度局域化；
· 治疗前已存在的T细胞克隆被大规模扩增，而非新克隆产生；
· 克隆扩张程度与总生存期显著正相关；
· 扩增克隆几乎无HSV病毒特异性，以肿瘤反应性为主。
fig. 7 治疗前后肿瘤/血液TCR克隆性对比
fig. 8 克隆扩张组vs收缩组生存期KM曲线
fig. 9 TCR克隆抗原特异性比对环形图
· 治疗后复发样本中缺氧型MES-like 2亚群显著扩张；
· 高表达CA9、VEGFA，形成T细胞排斥屏障；
· 长期地塞米松使用会削弱T细胞克隆扩增。
fig. 10 VEGFA⁺缺氧区排斥 T 细胞空间图
该研究首次在人GBM中证实：
单次溶瘤病毒即可触发持久、深度的T细胞抗肿瘤免疫；
空间多组学直接发现T细胞原位杀伤，距离指标可预测疗效；
TCR测序明确核心机制：放大原有肿瘤反应性T细胞克隆，而非抗病毒免疫。
在临床研究方面，溶瘤病毒可作为GBM免疫基石疗法，单次给药即可实现长效免疫；TCR克隆扩增可作为疗效预测生物标志物，指导患者分层；临床应尽量缩短地塞米松使用时长，保护T细胞应答。
未来，可开展溶瘤病毒+免疫检查点抑制剂临床试验，提升复发性GBM生存率。
参考文献：Meylan M, Tian Y, Wu L, et al., Persistent T cell activation and cytotoxicity against glioblastoma following single oncolytic virus treatment in a clinical trial, Cell, 2026, 189, 1287-1304.
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