T 细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）复发率高，MRD 是最重要的预后指标。各种MRD检测技术各有其短板：流式细胞术（MFC）灵敏度有限，融合基因 PCR 仅覆盖不到半数患者，基于 TCR 重排的 NGS-MRD 在 T-ALL 中临床证据一直不足。
近日浙江大学医学院附属儿童医院血液科团队在Nature Communications（IF：18.1）杂志发表了题为“Measurable residual disease detected by next-generation sequencing in T-cell acute lymphoblastic leukemia”的重要研究成果，该研究首次系统阐明了 NGS MRD 技术在儿童 T-ALL 中的临床价值，为国内儿童 T‑ALL 精准风险分层提供高级别循证医学证据。
该研究采用的是艾沐蒽 Seq-MRD® 检测技术进行 NGS MRD 检测。浙江大学医学院附属儿童医院血液科团队自 18 年起就使用 Seq-MRD® 检测平台开展淋系白血病残留病监测，在 B-ALL 中已经发表了多篇高质量研究，其中一篇也是发表于 Nature Communications 杂志，明确了免疫球蛋白基因重排（IG）在儿童 B-ALL NGS-MRD 监测中的核心预后价值，详细解读见：重要进展！艾沐蒽Seq-MRD®在Nature Communications发表最新研究成果。
该文章是艾沐蒽 Seq-MRD® 平台发表的第 6 篇学术成果，也是国内首篇在 T-ALL 中系统评估 NGS MRD 预后价值的大规模研究成果。未来艾沐蒽将继续在血液肿瘤 NGS MRD 检测领域深耕不辍、持续探索，以前沿技术赋能精准诊疗，为血液肿瘤患者的康复之路注入更坚实的力量！
2018 年 2 月至 2024 年 12 月期间，从该院连续招募初发 T-ALL 患者，所有入组患者均按照 ZJCH-ALL-2019 方案治疗（NCT06525116）。
收集骨髓样本用于 MRD 评估，设置多个连续评估时间点，包括诊断时、诱导中期（MOI）、诱导结束（EOI）、巩固治疗结束（EOC）、诊断后6个月，此后根据 MRD 水平每 3 – 6 个月评估一次直至检测不到。MRD 值通过 MFC 和 NGS 评估 TRB 和 TRG 或 TRD 重排，在具有可检测融合基因的患者中也通过实时定量 PCR（RQ-PCR）追踪 MRD。NGS-MRD 值低于 0.0001% 被分类为 NGS-MRD 阴性，MFC-MRD 和 PCR-MRD 的阴性截断值设定为低于 0.01%。
NGS-MRD 检测使用 Seq-MRD® 平台对 TRB 和 TRG 进行深度检测，自 2023 年 5 月起增加 TRD 位点。诊断样本的输入DNA为 500 ng，治疗后样本使用至少 7 μg基因组 DNA。通过位点特异性引物组进行两轮 PCR 扩增，在 Illumina® NovaseqPE150 平台上测序。原始测序数据通过 Seq-MRD® 生物信息学工作流程处理，TCR 克隆型根据 IMGT 定义注释为互补决定区3（CDR3）序列。该检测在足够输入和覆盖条件下可达到每百万个细胞中一个肿瘤细胞（10⁻6）的灵敏度，在7 μg gDNA 输入时定量限为3×10-6。
共 117 例初发 T-ALL 患者入组，16 例无可追踪序列，101 例具有可追踪序列。非 ETP T-ALL 中 89.7% 的病例具有可追踪序列，而 ETP T-ALL 中仅为 50.0%。中位随访 46 个月，共计 22 例复发，16 例单纯骨髓复发，6 例髓外复发。
MRD 检测关键采样时间点：诱导中期 MOI、诱导结束 EOI、巩固结束 EOC、诊断后 6 个月、12 个月。
101 例可追踪病例中，共检出 295 个TCR克隆。84.2% 的患者存在 ≥ 2 个可追踪克隆，仅 16 例患者仅有一个可追踪序列。TRB 检出率 84.2%，TRG 检出率 83.2%，27 例检测 TRD 位点的患者中，TRD 检出率为 55.6%。72 例（71.3%）同时检测到 TRB 和TRG序列，13 例（12.9%）仅检测到 TRB 序列，12 例（11.9%）仅检测到 TRG 序列。
10 例 ETP-ALL 患者中，仅有 5 例（50%）具有可追踪克隆。NOTCH1 突变与否不影响 TCR 克隆分布。随着年龄增长，可追踪 TCR 序列的多样性增加。
MOI 诱导中期仅 56.9% 患者 NGS-MRD＜1%，EOI 诱导结束仅 10.4% 达到深度阴性 MRD＜0.0001%，EOC 巩固结束，深度阴性比例飙升至 55.3%，之后 6 个月维持稳定。说明 T‑ALL MRD 清除主要发生在诱导结束到巩固结束之间，EOC 是关键时间点，EOI 诱导结束时的 NGS‑MRD 分层预后意义不强。
TRB-MRD 和 TRG/TRD-MRD 的清除动力学也存在差异。在 CR 患者中，40.8% 的 TCR 序列在 EOI 时被清除，39.1% 在 EOC 时被清除，仅有 6.1% 在 6 个月时进一步被清除。在同时具有 TRB 和 TRG/TRD 序列的患者中，TRB-MRD 清除速度显著快于 TRG/TRD-MRD。EOC 时 TRB 转阴率 70.9%，TRG/TRD 转阴率 57.3%（P=0.012）。TRG/TRD 更容易出现延迟清除（＞6 个月）。
在所有时间点数据集中，TRB-MRD 与 TRG/TRD-MRD 之间存在显著强正相关（Spearman r = 0.73，P
诱导结束 EOI 时 NGS-MRD 水平 ≥1%、≥0.01% 且 EOI 时的 NGS‑MRD 不能显著分层预后，EOC 是最强预后节点。
EOC 时 TRB 和 TRG/TRD-MRD 水平均与患者生存显著相关。达到 TRB-MRD TRB-MRD、TRG/TRD-MRD 在 EOC 均具备独立预后价值。
在亚组分析中，如果 TRB‑MRD 已经阴性，TRG/TRD 阳性与否不显著影响预后（4 年 EFS 率相当）。如果 TRB‑MRD 阳性，同时 TRG/TRD 也阳性，则预后极差，4年EFS 仅 35.0%±12.6%。在 TRG/TRD 阳性患者中，合并 TRB 阳性者与 TRB MRD 阴性者相比预后也显著更差。
TRB 是主要驱动预后的位点，但仍建议同时检测 TRB+TRG+TRD：一部分患者没有 TRB 标记，只能靠 TRG/TRD 监测；同时双位点阳性可以降低正常反应性 T 细胞带来的假阳性风险。
EOC NGS-MRD＜0.0001% 组单纯骨髓复发累积发生率仅 4.2%±2.9%；0.0001% – 0.1% 组为 22.1%±9.8%，≥0.1% 组高达 47.9%±13.0%，三组具有显著差异，说明 NGS‑MRD 可以很好预测单纯骨髓复发。但是在髓外复发患者中，NGS-MRD 水平与复发率 CIR 无显著关联。
MFC 转阴比 NGS 更早，相当比例的 MFC‑MRD 阴性患者 NGS‑MRD 仍然阳性。EOC 配对比较显示，44 例患者两种方法均阴性，MFC-MRD 阴性而 NGS-MRD 阳性患者有 38 例，仅 4 例患者 MFC-MRD 阳性而 NGS-MRD 阴性。NGS 阳性但 MFC 阴性（NGS+/MFC-）MRD 的患者 4 年 EFS 率为 60.8%±9.4%，显著差于双阴性患者的 84.9%±5.3%（P = 0.038）。说明单纯流式判读 MRD 阴性会漏掉高危复发人群，NGS MRD 预测预后更准确。
仅 45 例患者接受了基于基因组融合断裂点的 RQ-PCR MRD 监测，EOC 时 PCR-MRD NGS-MRD 在 PCR-MRD 阴性患者中未能进一步区分预后。但 T‑ALL 中仅有不到一半患者有融合靶点，绝大多数无融合基因的患者，TCR NGS-MRD 仍是高灵敏度 MRD 监测的核心工具。
对于 EFS，NOTCH1 突变和 EOC 时 MFC-MRD 是独立预测因子。NOTCH1 突变是有利因素（HR = 0.292，P = 0.004），MFC-MRD≥0.01% 提示更高风险（HR = 3.360，P = 0.036）。NGS-MRD 在单因素分析中显著（P = 0.003），但在多因素分析中不显著（P = 0.122）。
对于无复发生存率（RFS），NOTCH1 突变、MFC-MRD≥0.01% 和 NGS-MRD≥0.0001% 均为独立预后因素。
该研究表明基于 TCR 的 NGS-MRD 是 T-ALL 管理中有价值的工具，提供高灵敏度和可靠的预后精度。EOC 和 6 个月时 NGS-MRD≥0.0001% 的患者复发风险显著更高。TRB 和 TRG/TRD 的联合追踪为风险分层提供了可靠框架。本研究研究聚焦儿童 T‑ALL，系统评价了基于 TCR 重排的 NGS‑MRD 临床价值。
文章来源
Liao, C., Chen, H., Xu, L. et al. Measurable residual disease detected by next-generation sequencing in T-cell acute lymphoblastic leukemia. Nat Commun (2026).
艾沐蒽专注于免疫组二代测序领域多年，是于2016年全国首家推出血液肿瘤NGS MRD检测产品Seq-MRD®的公司。Seq-MRD®适用于B/T系白血病、B/T系淋巴瘤、多发性骨髓瘤，能够帮助临床医生预测长期疗效、评估治疗效果、监测缓解状态以及监测早期复发。经过多年的积累和发展，Seq-MRD®在临床检测和科学研究上均取得不少成果，并获得国际市场认可。
艾沐蒽创始人参与了中华医学会儿科学分会血液学组等权威机构联合发布的《儿童白血病微小残留病监测与临床应用指南（2026）》的撰写，为NGS MRD指导临床治疗的标准化与规范化提供重要指导意见。
Seq-MRD®获得欧盟CE资质（注册号：DE/CA20/01-IVD-Luxuslebenswelt-190/22），获批的是人淋巴B细胞微小残留病基因检测试剂盒（可逆末端终止测序法）。
艾沐蒽推出的Seq-MRD®血液癌症MRD检测是最早批实现商业化的产品，自2016年研发专利技术至今，艾沐蒽Seq-MRD®已经获得3项国家发明专利：
[1]“一种应用于高通量测序检测T细胞白血病微小残留病的引物组合及试剂盒”（专 利 号: 2016 11204857.0，授权公告号:CN 106957906 B）
[2]“一种检测微小残留病MRD的试剂盒”（专 利 号: 2018 1 1550133.0，授权公告号: CN 109652518 B）
[3]“一种检测微小残留病MRD的方法”（专 利 号: 2018 1 1549203.0，授权公告号: CN 109680062 B）
艾沐蒽拥有自主研发的生信分析平台，艾沐蒽Seq-MRD® 已经获得3项国家计算机软件著作：
[1]“免疫组库MRD检测自动化报告系统[简称ImmuReport] V1.0”（登记号：2019SR0916207）
[2]“Seq-MRD检测自动化分析系统（DiscTermite）[简称：DiscTermite]0.4.6“（登记号：2019SR1131517）
[3]“基于免疫组库二代测序的微小残留病（MRD）检测数据处理系统”（登记号：2020SR0507594）
1、艾沐蒽联合浙大附一黄河教授完成的《新型CAR-T细胞研发及其治疗恶性血液病临床转化创新体系建立》获2023年度浙江省科学技术进步奖一等奖。Seq-MRD®在该技术的创新与应用中起到了关键性作用。
2、艾沐蒽申报的“免疫组TCR/Ig高通量测序技术/血液肿瘤微小残留病（MRD）检测/Seq-MRD®”因其创新性、前沿性、市场实用性荣获“2022年度CCTB中国肿瘤标志物产业创新大会创新技术/产品评选”项目二等奖。
2023年获批了【全血/骨髓基因组DNA提取试剂盒】（离心吸附柱法）备案编号：浙杭械备20230798 ，试剂盒分别适用于人外周血、骨髓样本的核酸的提取。
1、Huang Y, Zhao H, Shao M, Zhou L, Li X, Wei G, Wu W, Cui J, Chang AH, Sun T, Hu Y, Huang H. Predictive value of next-generation sequencing-based minimal residual disease after CAR-T cell therapy. Bone Marrow Transplant. 2022 Jun 1. doi: 10.1038/s41409-022-01699-2. Epub ahead of print. PMID: 35650329.（点击链接可查看文章内容）
2、Chen H, Gu M, Liang J, Song H, Zhang J, Xu W, Zhao F, Shen D, Shen H, Liao C, Tang Y, Xu X. Minimal residual disease detection by next-generation sequencing of different immunoglobulin gene rearrangements in pediatric B-ALL. Nat Commun. 2023 Nov 17;14(1):7468. doi: 10.1038/s41467-023-43171-9. （点击链接可查看文章内容）
3、Min’er Gu,Yahong Xia, Jingying Zhang, Yongmin Tang, Weiqun Xu, Hua Song Xiaojun Xu. The effectiveness of blinatumomab in clearing measurable residual disease in pediatric B-cell acute lymphoblastic leukemia patients detected by next-generation sequencing. Cancer Med. 2023 Dec;12(24):21978-21984. doi:10.1002/cam4.6771. （点击链接可查看文章内容）
4、Yan N, Wang ZL, Wang XJ, et，al. Measurable residual disease testing by next generation sequencing is more accurate compared with multiparameter flow cytometry in adults with B-cell acute lymphoblastic leukemia. Cancer Lett. 2024 Jul 4;598:217104. doi: 10.1016/j.canlet.2024.217104.
5、CHEN HP, MIAO J, FAN LY, et al. Non-specific clones hamper the reliability of Ig light chain gene rearrangements in next-generation sequencing-based measurable residual disease monitoring in pediatric B-cell ALL: A single-center cohort study[J]. Annals of Laboratory Medicine, 2026.
6、Liao, C., Chen, H., Xu, L. et al. Measurable residual disease detected by next-generation sequencing in T-cell acute lymphoblastic leukemia. Nat Commun (2026).
2023年DelveInsight公司发布的MRD国际市场研究报告中，艾沐蒽/Seq-MRD®是中国唯一一家公司/产品进入国际调研市场报告。DelveInsight是一家领先的医疗保健市场研究和商业咨询公司，以其现成的联合市场研究报告以及为医疗保健行业的公司提供的定制解决方案而闻名。
杭州艾沐蒽生物科技有限公司成立于2016年，是国际前沿的专注于免疫驱动医学技术的国家高新技术企业和专精特新企业。创始人团队来自美国芝加哥大学，在2010年开始使用免疫组基因高通量测序技术开展各种疾病相关研究，于2016年通过自主研发，全国首家推出NGS-MRD血液肿瘤微小残留病（MRD）检测Seq-MRD®，并授权泛生子使用。同时，公司拥有Immun-Traq®肿瘤治疗伴随诊断、Immun-Cheq® 免疫力测评以及ImmuHub®免疫组测序科研服务产品，并布局有基于AI机器学习算法的T-classifier®肿瘤早筛、单细胞测序、新抗原、TCR和抗体发现等平台管线。目前为止发表了50余篇论文，其中包括：The New England Journal of Medicine(IF:158.5), The Lancet(IF:98.4), Nature(IF:65), Signal Transduction and Targeted Therapy(IF:40), Cellular and Molecular Immunology(IF:24), Nature Communications (IF:17)等多篇高分杂志。公司构建几十项发明专利和软件著作权为核心的自主知识产权体系，为医院临床、生命科学研究、新药开发等提供解决方案和产品。艾沐蒽专注于通过解码适应性免疫系统来改变疾病的诊断和治疗，并致力于推进免疫驱动医学领域发展。
